2026年10月30日，国家药监局发布《关于将〈化妆品中微生物检验方法总则〉等7项方法纳入化妆品安全技术规范的公告》（2026年第105号）：经化妆品标准化技术委员会主任会议审查通过，将7项方法纳入《化妆品安全技术规范》。其中5项微生物检验方法为修订后替换原方法，原章节内容同时废止；洋葱伯克霍尔德菌群检验方法、胶原蛋白凝胶眼刺激性试验为2项新增方法。6项微生物方法自2027年12月1日起实施，胶原蛋白凝胶眼刺激性试验自2027年5月1日起先行实施，实施前鼓励注册备案检验采用[1]。公告发布后，中检院同步起草发布配套问答，逐项说明修订背景与技术细节[2]。对企业来说，这轮更新意味着三件事：检验方法版本要切换、含水配方的微生物风险面在扩大、眼刺激评价多了一个不依赖动物的选项。
一、公告全貌：5项修订、2项新增
7项方法的类型、纳入章节和实施时间如下表所示，其中修订的5项全部集中在第五章微生物检验方法，两项新增则分别落在微生物检验方法和毒理学试验方法两个板块。
| 方法名称 | 类型 | 纳入章节 | 实施时间 |
|---|---|---|---|
| 化妆品中微生物检验方法总则 | 修订替换 | 第五章1 | 2027-12-01 |
| 化妆品中菌落总数的检验方法 | 修订替换 | 第五章2 | 2027-12-01 |
| 化妆品中耐热大肠菌群的检验方法 | 修订替换 | 第五章3 | 2027-12-01 |
| 化妆品中金黄色葡萄球菌的检验方法 | 修订替换 | 第五章5 | 2027-12-01 |
| 化妆品中霉菌和酵母菌总数的检验方法 | 修订替换 | 第五章6 | 2027-12-01 |
| 化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群的检验方法 | 新增 | 第五章13 | 2027-12-01 |
| 胶原蛋白凝胶眼刺激性试验方法 | 新增 | 第六章52 | 2027-05-01 |
公告发布后，被替换的5个原章节内容同时废止，新旧方法之间有约一年的并行过渡期——这段过渡期里新旧方法都可用，监管明确表态"鼓励"提前采用新方法，这对2027年送检的企业和检验机构都是缓冲安排。
二、修订总则：从"缺项"到补齐方法适用性
先看一个容易忽略的细节：5项修订方法全部统一成了"化妆品中……的检验方法"的命名格式，方法名称与文件性质对应得更清楚。真正的变化在总则内部。按中检院问答的说明，修订的直接动因是《规范》2015年版原总则缺少培养基质量评价和方法适用性试验要求，无法有效评估化妆品中防腐成分的抑菌作用，容易造成假阴性、导致污染产品漏检；此次修订参考了ISO、USP等国际标准[2]。落到文本上，主要补齐了六块内容：
- 新增实验室基本要求：从环境、人员、设备、检验用品、菌株管理五个方面系统规定，明确洁净区域、BSL-2实验室及人员资质要求；
- 附录D培养基质量评价：每批次培养基开展促生长能力、抑制能力、生化特性三项评价，建立参比培养基制度，解决培养基批间差异；
- 4.4与附录E方法适用性试验：分别规定定量、定性检验的适用性试验方法，明确稀释、中和剂、薄膜过滤等抑菌成分消除途径；
- 新增生物安全与质量控制要求：明确对照试验设置和人员考核要求，规范过程质量控制；
- 新增检验后样品处理要求：致病菌样品无害化处理，规范样品处置流程；
- 完善附录体系：系统收录培养基配方，新增设备清单、染色规程、质控要求、适用性规程、推荐菌株等附录。
化妆品普遍含防腐体系，样品本身的抑菌性是微生物检验假阴性的主要来源——菌被防腐剂压住长不起来，报告"未检出"并不代表产品真的安全。这次修订把"实验室条件—培养基质量—适用性试验—抑菌性消除—质控菌株"串成闭环，新增的洋葱伯克霍尔德菌群检验方法也直接引用总则的4.3（检液制备）、附录C和附录E，修订后的总则已经是支撑全部单项方法的"地基文件"。对企业的影响是直接的：今后委托检验的报告里应当能看到适用性试验的过程和结论，抽检复检时不同实验室的结论也会更可预期。
三、五项单项方法，各自改了什么
问答逐项披露了四项单项方法的修订要点，全部围绕同一个主题展开：消除防腐体系带来的假阴性，把质控要求写进方法本身[2]。
| 方法 | 主要修订点 |
|---|---|
| 菌落总数 | 新增薄膜过滤法及对应的计数与报告规则；明确3株推荐质控菌株；优化显色剂氯化三苯四氮唑的使用浓度，提高计数准确性 |
| 耐热大肠菌群 | 一步发酵改为两步发酵：先36±1 ℃初发酵使大肠菌群复苏，再44.5±0.5 ℃复发酵，降低基质效应、提高灵敏度；取消靛基质试验判定步骤；增加方法适用性描述 |
| 金黄色葡萄球菌 | 增菌培养时间由24小时延长至24～48小时；新增生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统作为鉴定方式；必要时按培养基稀释法开展方法适用性试验 |
| 霉菌和酵母菌 | 计数培养基改为卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基（增加中和成分）；培养温度由28±2 ℃调整为25±1 ℃；新增薄膜过滤法；适宜计数范围由5～50 CFU调整为15～150 CFU（参考ISO 16212:2017） |
几个变化值得单独留意。菌落总数方法的问答特别提到，新方法可满足儿童、眼唇等风险较高产品严格限量的要求，支撑差异化风险管控——限量越严，计数准确性越关键。耐热大肠菌群的两步发酵、霉菌和酵母菌的25±1 ℃培养温度，都是用更贴近国际标准的条件换取更高灵敏度与更少误判。薄膜过滤法在菌落总数和霉菌酵母菌两个方法里同时出现，配合总则附录E，等于给"防腐剂压菌"这个老大难问题提供了标准化的解法。
四、洋葱伯克霍尔德菌群：一个"老对手"首次有了标准检验方法
洋葱伯克霍尔德菌群（Burkholderia cepacia complex）按公告附件7的定义，是一类需氧非发酵的革兰氏阴性杆菌，借助极生鞭毛运动，由多种表型近似但基因型有差异的菌种组成，代表菌种为洋葱伯克霍尔德菌。它在含水产品领域的名声不好：既是机会性致病菌，对免疫低下人群威胁大，又以对防腐剂和消毒剂的强耐受性著称，一旦在水系统里定殖很难根除。中检院问答明确了制定逻辑：国内化妆品风险监测结果显示该菌群在产品中有检出，而现行《规范》尚未建立专属检验方法，制定专属方法是为补齐高危致病菌的监管标准短板[2]。
把它推入《规范》的直接证据来自抽检研究。浙江省食品药品检验研究院对2017—2022年国家级化妆品监督抽检、浙江省本级抽检和行政许可检验中分离的149株污染微生物做筛查，鉴定出10株洋葱伯克霍尔德菌，全部属于该菌群；二代测序检出26种耐药基因、11种多重耐药基因，提示该菌可能对约33种抗菌药物耐药[3]。另一项针对纯露类化妆品的研究也确认：水基质产品中该菌群污染风险高，平皿法专属性好，可直接支撑标准方法建立[4]。国际上对这一菌群的处理思路一致——含水非无菌产品领域早已把它按"不可接受微生物"管理，美国药典USP〈60〉收载了专门的检查方法。
公告发布的新方法采用经典培养鉴定路径，操作步骤如下：
- 按总则4.3制备1:10检液，取10 mL接种90 mL SCDLP液体培养基，36±1 ℃增菌48～72小时；
- 划线接种洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂（BCSA）平板，36±1 ℃培养48～72小时，典型菌落为棕绿色带黄色晕圈，或白色菌落、培养基呈粉色至粉红色；
- 挑可疑菌落转TSA平板纯化，革兰氏染色镜检为阴性杆菌者继续；
- 氧化酶试验（阴性或2～10分钟内显色的迟缓型阳性）联合枸橼酸盐利用试验（阳性）判定；
- 可用生化鉴定试剂盒或鉴定系统，必要时用分子生物学方法进一步确证，最终报告检出或未检出洋葱伯克霍尔德菌群。
问答补充了几个实操层面的要点：SCDLP增菌经验证可有效富集样品中低载量的目标菌，减少漏检；检验只需鉴定至菌群水平即可满足监管要求，如需细分菌种可用分子生物学技术补充鉴定；生化鉴定环节允许使用试剂盒或鉴定系统替代，适配不同层级实验室的条件[2]。对企业而言，即使距离2027年12月1日的实施日还有一年多，含水配方占据主要阵地的品类——纯露、喷雾、啫喱、面膜液、水乳体系——现在就该把这一菌群纳入风险评估视野：防腐挑战试验的设计是否覆盖耐受性强的革兰氏阴性杆菌、生产水系统和包材的微生物控制是否到位、供应商出厂指标是否需要先行加检，都值得逐项过一遍。相关思路可参考站内关于化妆品防腐挑战试验的分析。
五、胶原蛋白凝胶眼刺激性试验：替代方法体系再下一城
第六章毒理学试验方法新增的第52号方法，是这批公告里落地最早的一项——2027年5月1日实施，比6项微生物方法早了7个月。方法的原理是：将人角膜上皮细胞接种在胶原蛋白凝胶上构建角膜上皮模型，通过检测暴露于受试物后模型跨膜电阻随时间的变化，判断角膜上皮屏障的破坏程度，进而预测和评价受试物的眼刺激性/腐蚀性[5]。问答特别强调了三个技术要点：模型采用气-液界面培养构建，跨膜电阻必须达到试验要求；电阻仪应满足标准规定的量程和灵敏度；本方法适用于单一成分的化妆品用化学原料的眼刺激性评价[2]。
这个方法并不突然。2025年1月，中检院曾就《胶原蛋白凝胶-眼刺激性试验（征求意见稿）》公开征求意见，起草说明将其定位为眼刺激试验整合评价策略中"自下而上"路径的起始方法，与《化妆品安全技术规范》现有方法形成互补[5]。《规范》现有三种眼刺激相关方法——家兔急性眼刺激性/腐蚀性试验、体外兔角膜上皮细胞短时暴露试验、荧光素渗漏试验——分别覆盖体内确认和两类体外筛查，胶原凝胶法的加入让"自下而上"策略有了新的起始工具。按问答的说法，本标准主要参考OECD 2026年更新的TG 494指南（Vitrigel眼刺激性测试方法，同样以胶原凝胶培养人角膜上皮细胞、以跨上皮电阻为检测终点）研究转化，可作为眼刺激性危害识别整合测试与评估策略的备选方法，是对现有眼刺激性评价标准的补充[2][6]。
受益最直接的是原料端。新原料备案和安全评估都需要眼刺激终点数据，替代方法意味着更少的动物试验、更短的数据获取周期。但要明确它的边界：适用对象是单一成分的化妆品用化学原料，定位是整合策略中的识别工具，用于区分"无须分类"与具有刺激性的物质，结果不确定或需要分级确认时，仍要按整合策略组合其他方法完成判定，不能简单理解为"一法包打眼刺激"。
六、企业应对：两批实施、一个鼓励期
把时间轴摆出来，企业的动作节点就清楚了：
- 现在至2027年5月1日：关注受托检验机构对胶原蛋白凝胶眼刺激性试验的能力建设进度；原料供应商端沟通眼刺激替代数据的提供方案；含水配方产品启动洋葱伯克霍尔德菌群的内部风险评估。
- 2027年5月1日：胶原蛋白凝胶眼刺激性试验正式纳入《规范》，原料检验和安评委托可直接采用。
- 2027年12月1日：6项微生物方法实施，原5项方法章节同时废止，送检委托单、企业标准和放行指标中的方法引用应在此之前完成切换。
- 过渡期全程：新方法实施前鼓励采用，送检时务必与实验室书面确认所用方法版本，避免报告引用已废止方法或新旧版本混用。
还有一点容易被忽略：监管抽检和许可检验的口径会随新方法逐步切换，企业自己的出厂检验和留样观察安排如果长期不动，一旦与抽检方法出现版本差，就可能陷入"自检合格、抽检异常"的解释困境。方法切换期的合规成本，主要就花在对齐这些细节上。
参考资料（官方来源）
| 序号 | 来源 | 内容 |
|---|---|---|
| [1] | 国家药监局官网（nmpa.gov.cn） | 关于将《化妆品中微生物检验方法总则》等7项方法纳入化妆品安全技术规范的公告（2026年第105号，2026年10月30日） |
| [2] | 化妆品标准化技术委员会官网（nidc.org.cn） | 关于《化妆品中微生物检验方法总则》等7项方法的问答（中检院起草，2026年11月2日） |
| [3] | 《中国现代应用药学》2025年第42卷第1期 | 化妆品中10株洋葱伯克霍尔德菌的筛查鉴定及耐药基因研究 |
| [4] | 《生物技术进展》2026年第16卷第1期 | 纯露类化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群检查方法的评价 |
| [5] | 中贸合规中心（zmuni.com） | 中检院发布胶原蛋白凝胶-眼刺激性试验（征求意见稿）相关整理，2025年1月 |
| [6] | 上海实验动物研究中心（slarc.org.cn） | OECD眼刺激替代方法体系介绍（含TG 494 Vitrigel方法） |
常见问题解答
7项新检验方法分别从什么时候开始实施？
分两批：胶原蛋白凝胶眼刺激性试验自2027年5月1日起实施；《化妆品中微生物检验方法总则》等6项微生物方法（含新增的洋葱伯克霍尔德菌群检验方法）自2027年12月1日起实施。各方法实施前，监管部门鼓励化妆品注册、备案相关检验提前采用。
洋葱伯克霍尔德菌群是什么，为什么新增它的检验方法？
它是一类需氧非发酵的革兰氏阴性机会性致病菌，对免疫低下人群威胁大且易多重耐药。抽检研究和国内风险监测均显示其在含水化妆品中有检出、污染风险较高，而现行规范没有专属检验方法，因此经风险评估后制定专属方法纳入标准体系。
被替换的5项微生物检验方法还能继续用吗？
2027年12月1日前，原方法仍可使用，同时鼓励提前采用新方法；2027年12月1日新方法实施后，总则、菌落总数、耐热大肠菌群、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌总数5项原章节内容同时废止，送检应一律采用新方法。
这次微生物方法修订主要解决了什么问题？
核心是消除防腐体系导致的假阴性：总则新增培养基质量评价和方法适用性试验规程，单项方法增加薄膜过滤法、延长增菌时间、调整培养基配方和培养条件，并统一了质控菌株要求，使检验结果更真实反映产品微生物污染水平。
胶原蛋白凝胶眼刺激性试验能完全替代动物眼刺激试验吗？
不能简单替代。该方法适用于单一成分的化妆品用化学原料，通过人角膜上皮模型检测跨膜电阻变化识别眼刺激性/腐蚀性，定位为眼刺激整合测试与评估策略的备选方法；结果不确定时仍需按整合策略组合其他试验方法完成判定。
